Utilização de biosensores na deteção rápida de SNPs associados à resistência aos antimaláricos com base na estratégia de amplificação isotérmica.

Apesar do esforço global para reduzir a transmissão da malária, poucos avanços têm sido registados durante a última década. A resistência aos medicamentos é reconhecida como um dos obstáculos no controlo da malária e a falta de tecnologias de diagnóstico rápidas, económicas e simples para detetar a resistência aos medicamentos antimaláricos é uma das principais causas da disseminação de parasitas resistentes. O objetivo do presente estudo é o de desenvolver uma ferramenta rápida e económica a ser implementada em point-of-care, para deteção de polimorfismos de nucleótido único (Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs) associados à resistência a sulfadoxina-pirimetamina, combinação terapêutica ainda utilizada em muitas áreas endémicas, no Tratamento Preventivo Intermitente de gestantes (IPTp) - genes diidropteroato sintetase (pfdhps) e diidrofolato redutase (pfdhfr), respetivamente. O teste baseia-se na deteção ótica da extensão isotérmica de primers em fase sólida. Para cada SNP a ser detetado, primers tiolados na extremidade 5' são imobilizados na superfície de placas de microtitulação ativadas por maleimida para deteção colorimétrica (1). Os primers hibridam com o DNA genómico, hibridando a última base do primer com o SNP em teste. Os primers são idênticos, com exceção da base terminal 3'OH e a extensão do primer com nucleótidos marcados com peroxidase (Horseradish peroxidase, HRP) só ocorrerá com o primer que tem a base complementar à base do SNP. Os ensaios de otimização estão a ser realizados utilizando DNA de clones de parasitas com sequências conhecidas, após o que se validarão os resultados com amostras biológicas. No final do projeto, antecipamos o desenvolvimento de uma plataforma portátil, de baixo custo, sem a necessidade de utilização de estratégias de amplificação prévias, o que constitui um grande benefício para implementação em áreas endémicas de malária. (1) DOI: 10.1021/acs.analchem.1c03419 Financiamento: GHTM IHMT NOVA (UIDB/04413/2020/RESMALDETECT)